第一種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟，使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。這是優(yōu)先選用的方法，且不對細胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。

連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法1

使原培養(yǎng)基內(nèi)的細胞連續(xù)地經(jīng)過以下幾個階段：

階段1：75%補加血清的培養(yǎng)基或25%無血清培養(yǎng)基

階段2：50%補加血清的培養(yǎng)基或50%無血清培養(yǎng)基

階段3：25%補加血清的培養(yǎng)基或75%無血清培養(yǎng)基

階段4:100%無血清培養(yǎng)基

連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法2

1、以原培養(yǎng)基中的相同濃度，將血清加入無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將細胞從含血清的原培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到加了血清的無血清培養(yǎng)基，此時應(yīng)注意要提高新培養(yǎng)系統(tǒng)中的細胞密度。讓細胞有一個適應(yīng)過渡期。

2、按照方法1，緩慢地降低血清濃度，使細胞在每個階段有適應(yīng)的時間。

3、一旦血清補加量降為0，在用于進行分析或其他操作前，讓細胞培養(yǎng)物具有數(shù)個適應(yīng)過渡期。

另一種方法是直接適應(yīng)。其中，細胞直接從含血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將大量細胞直接轉(zhuǎn)移到無血清或無蛋白的新培養(yǎng)基內(nèi)。細胞必須處于指數(shù)生長期中期，且存活率>90%。

每3到4天更換約50%的培養(yǎng)基，以防止培養(yǎng)基變成酸性。維持高于正常值的細胞培養(yǎng)密度，直至培養(yǎng)的細胞需要每日更換培養(yǎng)基。這時，將細胞擴增到多個培養(yǎng)瓶內(nèi)。

考慮建議

請在適應(yīng)過程中，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感。讓細胞在每個階段都至少有一個適應(yīng)過渡期。

細胞存活率和細胞密度

細胞在對數(shù)生長期中期快速分裂，且在適應(yīng)過程開始時，存活率大于90%。這一點至關(guān)重要。當細胞需傳代時，建議采用1:2或1:3的小傳代比例，以維持更高的細胞密度，同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子。當細胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時，在增大細胞傳代密度。

細胞生長

如果在適應(yīng)過程中，細胞停止了生長，則需讓細胞有更多的時間來適應(yīng)培養(yǎng)基組合。例如，在方法1的階段4，向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基。然后，在幾個過渡期內(nèi)，緩慢地減少血清量，直至學清量為0。

懸浮培養(yǎng)物

Meiatech公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細胞附著延伸影子。在一段過渡期內(nèi)，貼壁細胞將開始離開表面，并成為懸浮細胞系開始生長。細胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化。監(jiān)測細胞的生長速度，只要細胞能夠與新系統(tǒng)相融合，任何形態(tài)變化都不重要。

細胞叢

在適應(yīng)于無血清培養(yǎng)期間，細胞容易形成叢。傳代培養(yǎng)時，將叢輕輕折斷，使其分散開。將培養(yǎng)物從靜止細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶內(nèi)，這樣可能會有助于防止細胞叢的形成。

抗生素

由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此，不建議在無血清適應(yīng)過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白，則抗生素水平可能會對細胞產(chǎn)生毒性。

預(yù)防措施

確保在開始適應(yīng)過程前，儲存有大量原培養(yǎng)基的細胞。如果細胞沒有存活到下一階段，則在整個過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶。