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使用胰酶時，有哪些注意事項

2021-12-24 瀏覽次數(shù)：2286

胰酶的作用原理是什么呢？

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細胞在自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。

使用胰酶時需注意哪些細節(jié)問題？

在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker也可能會下降。胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對于纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。

注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。

一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，這時就應(yīng)該停止消化。

如何選擇正確的細胞消化試劑？

BI提供動物來源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。

動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。貼壁不牢和半貼壁細胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育，這樣易于控制，對細胞的傷害也降低。對于難消化的細胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是無限地延長消化時間。重組胰酶用于無血清培養(yǎng)。重組胰酶具有與動物源性胰蛋白酶相同的酶學(xué)性質(zhì)，但是不含任何動物源成分，可替代胰蛋白酶使用（常用于細胞治療）。

EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢？

許多人不用胰蛋白酶，只用EDTA，或者用胰蛋白酶/EDTA聯(lián)合作用。胰酶切割ECM（負責(zé)粘連和附著的蛋白），而EDTA通過螯合Ca²⁺，抑制Integrin的貼壁活性，所以EDTA的作用更加溫和。

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