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hUC –MSCs ，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 ：

中文名稱(chēng)：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 

代號(hào)：hUC –MSCs  

出售信息：P1代和P3代

來(lái)源：取自滿(mǎn)月自然分娩的胎兒臍帶，檢測(cè)結(jié)果表明，本產(chǎn)品無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體和病毒污染，表達(dá)多種間充質(zhì)干細(xì)胞特異標(biāo)記，具有良好的增殖和分化潛能，可以分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)（形態(tài)紡錘狀，成纖維細(xì)胞樣）

培養(yǎng)條件： DMEM/F12 90%+FBS 10%+b-FGF 10ng/mL （建議使用本公司間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基）

溫度：37℃  氣相：95%空氣，5%二氧化碳

培養(yǎng)瓶/皿：使用無(wú)血清培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)使用針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞特別TC處理的培養(yǎng)瓶/皿，或使用纖連蛋白或其他促貼壁試劑包被過(guò)的培養(yǎng)瓶/皿。

一、細(xì)胞特性：

經(jīng)測(cè)試，本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。流式檢測(cè)結(jié)果顯示，CD29、CD44、CD73、CD105、CD166陽(yáng)性，CD11a、CD34、CD45陰性。

二、運(yùn)輸保存：采用干冰保存運(yùn)輸

收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

三、產(chǎn)品承諾：

人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)周期有限。建議使用本公司配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來(lái)解凍、傳代，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖和分化能力。

四、用途：

本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療、臨床等其他方面。

1、用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，然后置于無(wú)菌操作臺(tái)，打開(kāi)瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6 mL新鮮培養(yǎng)基（以T25培養(yǎng)瓶為例）并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液。

2、待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%，需要對(duì)其進(jìn)行傳代，*次傳代比例為1:3，之后推薦傳代比例為1:5到1:10。

3、傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液與DPBS置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml DPBS，輕晃洗滌后棄去。使用DPBS將胰酶稀釋4倍，往瓶中加2 ml稀釋后的胰酶，置于室溫孵育消化（*次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為*消化時(shí)間，記錄*消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入2ml含血清的*培養(yǎng)基或其他胰酶中和液終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后收集細(xì)胞懸液并吹打成單個(gè)細(xì)胞懸液，1200rpm離心5min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。

五、凍存條件：液氮存儲(chǔ)

80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO，備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。

六、常見(jiàn)問(wèn)題以及解決方案：

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過(guò) 72 小時(shí)）。

3、細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

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