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技術(shù)文章 / article
細(xì)胞復(fù)蘇的小技巧
2022-08-09 瀏覽次數(shù)：968
細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。
細(xì)胞復(fù)蘇流程：
1、將凍存的細(xì)胞從液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中進(jìn)行融化，輕柔晃動，加速融化，直到小瓶中只剩下一小塊冰，時(shí)長應(yīng)控制在1min中；
2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺中，打開瓶蓋前，用酒精燈火焰對瓶口進(jìn)行消毒；
3、將預(yù)加熱的新鮮*培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中，加入適量濃度和體積的*培養(yǎng)基，輕柔混合均勻；
4、200 × g左右細(xì)胞懸浮液離心5-10分鐘。實(shí)際的離心速度和持續(xù)時(shí)間因細(xì)胞類型而異。棄掉上清，加入新鮮*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并將其轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。
注意事項(xiàng)：
1、液氮溫度低，小心低溫對人造成的傷害，在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時(shí)存在爆炸的風(fēng)險(xiǎn)，因此，取出凍存管的時(shí)候，要做好個(gè)人防護(hù)。
2、通常細(xì)胞集中儲藏在液氮中，取出時(shí)應(yīng)迅速，避免溫差對其他凍存細(xì)胞造成影響。
3、復(fù)蘇細(xì)胞的核心技術(shù)，簡而言之就是快融，將在37°C水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞(< 1分鐘。
4、解凍時(shí)，凍存管先放入無菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。
5、用預(yù)熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細(xì)胞。
6、解凍細(xì)胞后，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量維持高密度，以提高細(xì)胞存活率。
7、注意無菌操作，避免細(xì)胞發(fā)生污染。
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